產(chǎn)品名稱：PT07 ProteanFect CRISPR Ultra 轉(zhuǎn)染試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：PT07

產(chǎn)品品牌：西湖凝聚體

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產(chǎn)品簡介 

ProteanFect CRISPR Ultra 轉(zhuǎn)染試劑是 ProteanFect 系列產(chǎn)品中專為難轉(zhuǎn)細(xì)胞系基 因編輯而設(shè)計(jì)的產(chǎn)品。該試劑盒基于自組裝蛋白納米顆粒，為一種非病毒、非電轉(zhuǎn)、非脂質(zhì) 體的轉(zhuǎn)染試劑，能夠更高效且安全地將基因編輯工具 RNP（Cas9 protein 和 guide RNA） 遞送至細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯。 

試劑盒儲(chǔ)存與成分說明

 ProteanFect CRISPR Ultra 轉(zhuǎn)染試劑采用干冰運(yùn)輸，收到后應(yīng)存放于 -80℃，直至使 用。

試劑盒規(guī)格依據(jù) Reagent B 的體積設(shè)定。試劑盒內(nèi)配備陽性對照樣品，其中含有編碼 綠色熒光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)操作流程和轉(zhuǎn)染效率；同時(shí)還有靶向人 TRAC 基因的 sgRNA，以此來檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作以及試劑質(zhì)量。開封后，為保障試劑性能處于 最佳狀態(tài)，各組分應(yīng)依據(jù)表 1 所列存儲(chǔ)條件妥善存放。

試劑盒通過干冰運(yùn)輸，收到后需立即存放于 -80℃。各組分存儲(chǔ)條件如下：

• Reagent A（PT07）：開封后保存于 2-8℃。

• Reagent B（PT07）：保存于 -20℃，避免反復(fù)凍融。

• Cas9 蛋白（1 µg/µL）：保存于 -80℃，避免反復(fù)凍融。

• EGFP mRNA（1 µg/µL）陽性對照：保存于 -80℃，用于驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。

• Human TRAC-sgRNA（1 µg/µL）陽性對照：保存于 -80℃，靶向序列為 TGTGCTAGACATGAGGTCTA。

產(chǎn)品名稱：ProteanFect CRISPR Ultra 轉(zhuǎn)染試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：PT07

產(chǎn)品品牌：西湖凝聚體

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常見問題 

常見問題解答

1. 如何提升轉(zhuǎn)染效率？

• 延長孵育時(shí)間（建議不超過 2 小時(shí)）。

• 增加轉(zhuǎn)染體系至初始量的 1.5-2.5 倍。

2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染前需注意哪些事項(xiàng)？

• 細(xì)胞活性需 > 90%，避免使用傳代超過 15 次的細(xì)胞。

• 新復(fù)蘇細(xì)胞需傳代 2-3 次后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3. 如何確定 RNP 的投入量？

• Cas9 蛋白與 sgRNA 的摩爾比建議為 1:1-1:2.5。以 96 孔板為例，Cas9 蛋白用量 0.8-1.6 µg 即可達(dá)到高效編輯。

4. 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞沉淀不明顯怎么辦？

• 小體積轉(zhuǎn)染（如 96 孔板）離心后細(xì)胞可能附著于管壁，移液時(shí)避免觸碰底部即可。

5. 能否同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè) sgRNA？

• 可以，但需確保每個(gè) sgRNA 濃度 ≥1 µg/µL，總用量不超過 10 pmol（以 96 孔板為例）。

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產(chǎn)品名稱：PT07 ProteanFect CRISPR Ultra 轉(zhuǎn)染試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：PT07

產(chǎn)品品牌：西湖凝聚體

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